Tile Stitching [PDF, 360 KB] - Life Technologies

アプリケーションノート
EVOS® FL Autoセルイメージングシステム
EVOS FL Auto
®
セルイメージングシステムによる
画像タイリングおよびスティッチング
イントロダクション
EVOS ® FL Auto セルイメージングシス
テムは、非常に効率のよいワークフロー
を 使 用して、完 全 自動 化 によるマル チ
チャンネル の 蛍 光および 透 過 光でのイ
メージングが可能な倒立デジタルイメー
ジングシステムです。高度な要求に応え、
かつ幅広いアプリケーションに対応する
ため、高解像度モザイクタイリングや複
数位置 のウェルスキャンをサポートし、
細 胞 カウントや タイムラプ スの 実 験 も
可能です。
EVOS ® FL Auto セルイメージングシステムでは、高解像度で複数の画像を取得し、
それらを貼り合わせることにより、標本の広い面積を高解像度でマッピングでき
ます。本機能は、組織切片や幹細胞コロニーの分析、または 96 ウェルプレートで
ウェル中の全細胞を観察する用途に最適です。EVOS ® FL Auto セルイメージング
システムは、モノクロームカメラとカラーカメラの両方を備えており、蛍光画像お
よびカラー画像を高解像度で取得できます。本アプリケーションノートでは、広範
に mCherry を発現するトランスジェニックマウスの腸切片において、10 倍の対物
レンズで連続した画像を取得しました。画像取得後、画像を貼り合わせ、組織切
片の全体像を得ました。
Materials
• mCherry Rat Monoclonal Antibody
(M11217)
• 4% paraformaldehyde
• Peroxidase Goat Anti-rat IgG
Secondary Antibody
• EVOS® Light Cube, Texas Red®
(AMEP4655)
方法
全組 織で mCherry を発 現しているトランスジェニックマウ
スを屠殺し、摘出した腸 組 織を4% パラホルムアルデヒドで
固 定しました。mCherr y 抗体( M11217 )は 1:15,000 で使
用し、ペルオキシダーゼと結 合した 抗ラット Ig 二 次 抗体に
よる検出を行いました。目的の染 色強 度が 得られるまで、
組 織 切片をペルオキシダーゼ 基質 溶液中でインキュベート
しました 。カラーカメラおよび モノクローム カメラを 使 用
し、EVOS® FL Autoセルイメージングシステムの Scan 機能
により、画像の取得および貼り合わせを行いました。
15
図 2. 倍率 10 ×で 取 得した
63 枚の画像を貼り合わせ、
つに統合した画像を作成し
117
ました。mCherr y の 発 現は
蛍光( A )または発色ペルオ
キシダーゼ 染 色( B)によっ
16
て検出されました。
A.
結果および考察
EVOS® FL Autoセルイメージングシステムにより、目的の指
定領域において個別の画像を取得し(図1)、それらの画像を
継ぎ目無く貼り合わせ、切片全体またはスキャンした領域を
1つの画像にまとめることができました(図 2)。各パネルの
光学的解像度および画像品質はフル画像でも維持されてい
ます(図 3)。
B.
A.
A.
B.
図 3. 貼り合 わせた画 像
に お い て も 、1 0 倍 の 対 物
レン ズ で 撮 影した 個 々の
画 像 は 解 像 度 を 保 って い
ま す。m C h e r r y の 発 現 は
蛍 光( A )ま た は 発 色 ペ ル
オ キ シ ダ ー ゼ 染 色( B )に
よってmCherry の発現を検
出しました。
B.
図1. 画像スキャンで取得した画像63 枚中の10 枚。mCherry の発現
は蛍光( A )および発色ペルオキシダーゼ染色(B)によってmCherry
の発現を検出しました。画像は10 倍の対物レンズで取得しました。
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